Irmão sete anos mais velho de Sherlock Holmes. Trabalhava como consultor em certos departamentos do Governo Britânico. Como dito por Holmes no caso do submarino Bruce-Pardington: "os mesmos dotes poderosos que dediquei à elucidação de crimes, ele tem utilizado em seus negócios particulares. As conclusões de cada departamento são apresentadas a ele, e ele é o centro polarizador, a caixa de compensação que dá o equilíbrio. Todos os outros são especialistas, porém, sua especialidade é onisciência. Suponhamos que um ministro necessite de informação acerca de um assunto que envolva a Marinha, a Índia, o Canadá e a questão do bimetalismo; ele poderia obter conselhos de vários departamentos separados, mas somente Mycroft poderá focalizá-los conjuntamente e prever como cada fator influenciaria o outro. Começaram por utilizá-lo a fim de facilitar o serviço, por comodidade; hoje tornou-se indispensável. Naquele grande cérebro, tudo está classificado, pronto para ser usado a qualquer momento. Em muitíssimos casos, sua palavra decidiu a política nacional. Vive exclusivamente para isso e não pensa em mais nada, salvo quando, a título de exercício intelectual, se digna atender-me se vou procurá-lo a fim de pedir-lhe opinião a respeito de algum de meus modestos problemas."

Holmes afirmava que seu irmão possuía talentos de observação e dedução ainda maiores que os seus, mas que lhe faltava energia e ambição para utilizá-los.

"De compleição robusta e maciça, havia algo nele que dava idéia de incrível inércia física. Contudo, sobre o corpo desajeitado surgia uma cabeça tão autoritária na vastidão da fronte, tão viva na expressão dos olhos profundos de um cinza aço, tão firme no contorno dos lábios e tão sutil no conjunto da fisionomia, que após a primeira impressão, era esquecido o corpo volumoso para se lembrar apenas da mente dominadora."

Bibliografia:
Os Planos do Submarino Bruce-Pardington, O Último Adeus de Sherlock Holmes, A. Conan Doyle, Ed. Melhoramentos
The Ultimate Sherlock Holmes Encyclopedia, Jack Tracy, Gramercy Books